كاشف كيميائي حيوي عالمي TaqMan Multiplex QPCR Master Mix

المزيج الرئيسي الشامل لـ TaqMan متعدد الإرسال qPCR

مبادئ التصميم التمهيدي:

1. يوصى بأن يكون طول منتج التضخيم بين 80-300 زوج قاعدي ؛

2. طول التمهيدي: 18-25 بي بي ؛

3. يجب أن يكون محتوى القاعدة G + C في البادئات بين 40٪ -60٪ ؛

4. فرق قيمة Tm بين البادئات التمهيدية والبادئات العكسية أقل من 2 ℃ ، وقيمة Tm بين 58-62 ℃ هي الأفضل ؛

5. عشوائية التوزيع الأساسي.

6. من الأفضل ألا تحتوي المواد الأولية على متواليات ذاتية التكميل ، وإلا فإنها ستشكل بنية دبوس شعر ثانوية ؛

7. لا ينبغي أن يكون هناك أكثر من 4 قواعد تكميلية أو متجانسة بين اثنين من البادئات ، وإلا فسيتم تشكيل ثنائي التمهيدي ، وخاصة التداخل التكميلي في النهاية 3 ؛

8. يُقترح أن تكون القاعدة الطرفية 3 'للتمهيد G أو C ؛

9. لم يتم العثور على منتجات أخرى غير محددة في نتائج مقارنة NCBI.

مقدمة من Universal TaqMan Multiplex qPCR master mix:

هذا المنتج عبارة عن حل بريمكس 2x لـ qPCR باستخدام طريقة التألق الخيمري GSK Green I.المكون الأساسي ، Taq DNA Polymerase ، عبارة عن بوليميراز DNA منشط بالحرارة يتم حظره بواسطة طريقة الجسم المضاد ، والتي يمكن أن تمنع بشكل فعال التضخيم غير المحدد في ظل ظروف درجات الحرارة المنخفضة.وفي الوقت نفسه ، جنبًا إلى جنب مع المخزن المؤقت للتفاعل المحسن لـ qPCR ، فإن Taq DNA Polymerase مناسب جدًا للخصوصية العالية وتفاعل qPCR.يمكن الحصول على منحنى معياري جيد في منطقة كمية واسعة ، وهي دقيقة وقابلة للتكرار وموثوقة للتحليل الكمي للجينات المستهدفة.في الوقت نفسه ، يحتوي هذا المنتج على صبغة مرجعية سلبية خاصة ROX مناسبة للاستخدام في جميع أدوات qPCR ، وليست هناك حاجة لضبط تركيز ROX على الأدوات المختلفة.تتم إضافة الصبغة الزرقاء في الخلطة المسبقة ، والتي لها تأثير التتبع لإضافة العينات ، ويتم توفير مخفف القالب الأصفر في نفس الوقت.عندما يتم تخفيف القالب بمخفف القالب الأصفر وإضافته إلى خليط التفاعل الأزرق ، يتغير اللون من الأزرق إلى الأخضر ، والذي يمكن أن يلعب دور التتبع في إعداد عملية نظام التفاعل ومنع التسرب أو سوء الإضافة.لا تتداخل أطياف الأصباغ الزرقاء والصفراء مع أصباغ qPCR ولا تؤثر على نتائج التفاعل.

بروتوكول الفحص / إجراءات حولالمزيج الرئيسي الشامل لـ TaqMan متعدد الإرسال qPCR:

1. (اختياري) تمييع القالب:

توفر هذه المجموعة 40x YELLOW Template Buffer ، وهو 40 ضعفًا مخففًا للقالب الأصفر يمكن استخدامه لتحديد ما إذا كان القالب قد تمت إضافته إلى سائل تفاعل qPCR عن طريق تغيير لون السائل.بأخذ نظام تفاعل 20ul qPCR كمثال ، وفقًا لمقدار قالب التخفيف المضاف إلى محلول تفاعل 20ul qPCR ، يمكن الرجوع إلى طريقة التخفيف المقابلة للقالب الأصلي إلى الجدول التالي (مع أخذ القالب الأصلي المخفف إلى 100ul كمثال ):

مثال:

يجب إضافة قالب 2ul المخفف إلى نظام تفاعل 20ul qPCR.

بأخذ نظام 100ul Template Dilution كمثال ، عندما يكون حجم القالب الأصلي 20ul ، تتم إضافة 25ul 40x Yellow Template Dilution Buffer ، ثم يضاف الماء الخالي من Nuclease 55ul إلى الحجم الإجمالي 100ul.

40x الأصفر المخفف النموذجي الآن 10x.أضف 2ul من القالب المخفف إلى 20ul Dilution Buffer ، و 40 × YELLOW Template Dilution Buffer النهائي هو 1x.في الختام ، يجب أن يكون المخزن المؤقت لتخفيف القالب الأصفر 1x في نظام qPCR النهائي.

معلومات عن منتج Universal TaqMan Multiplex qPCR master mix:

شروط التخزين والتعامل مع المزيج الرئيسي الشامل لـ TaqMan متعدد الإرسال qPCR:

نقل كيس الثلج الرطب ؛يحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية ، صالح لمدة 12 شهرًا.

ملحوظة:إذا لم يكن القالب بحاجة إلى التخفيف ، أو إذا لم يتم استخدام مخفف القالب G3362-2 ، فيمكنك تجاهل هذه الخطوة.

2.إجراء تفاعل PCR (يمكن تعديله وفقًا للأدوات):

أ: إذا كانت خصوصية التضخيم بحاجة إلى تحسين ، فيمكن استخدام إجراء من خطوتين أو درجة حرارة التلدين ؛لتحسين كفاءة التضخيم ، يمكن استخدام إجراء من ثلاث خطوات أو تمديد الوقت.

ملحوظة:

1. يرجى ارتداء القفازات التي تستخدم لمرة واحدة أثناء العملية لتجنب تلوث RNase.

2. يمكن تخزين منتجات النسخ العكسي عند -20 ℃ لفترة قصيرة.إذا كانت هناك حاجة إلى تخزين طويل الأجل ، فمن المستحسن تخزينها في -80 درجة مئوية بعد التعبئة لتجنب دورات التجميد-الذوبان المتكررة.

3. إذا كان القالب من أصل حقيقي النواة ، فمن المستحسن اختيار Oligo (dT) 18 Primer وإقرانه مع 3 'Poly A tail of eukaryotic mRNA للحصول على أعلى عائد من cDNA كامل الطول.

4. للنسخ العكسي لـ RNA بدائية النواة ، يجب استخدام Random Hexamer Primer أو Gene Specific Primer.

5. Random Hexamer Primer له تطبيق واسع ومناسب لقوالب mRNA و rRNA و tRNA و RNA الصغيرة و lncRNA.

6. إذا تم اتباع النسخ العكسي بمقايسة qPCR ، فيمكن خلط Oligo (dT) 18 Primer و Random Hexamer Primer لجعل كفاءة توليف (كدنا) في جميع مناطق الرنا المرسال نفسها ، مما يساعد على تحسين مصداقية وتكرار النتائج الكمية.

7. إذا تم تصميم بادئات qPCR اللاحقة عبر exons ، فيمكن حذف خطوة إزالة الجينوم.

المشاكل والحلول الشائعة:

إذا كنت بحاجة إلى مزيد من المعلومات حول المزيج الرئيسي Universal TaqMan متعدد الإرسال qPCR ، فيرجى إخبارنا عبر الإنترنت ، شكرًا لك.