|
تفاصيل المنتج:
|
| منتجات: | بي إس آي | إنزيمات التقييد المهندسة: | هضم سريع للحمض النووي في 5-15 دقيقة |
|---|---|---|---|
| موقع القطع: | 3'-CCAGAG (N) 5 -5 ' | احتضان: | 37 ℃. |
| التعطيل الحراري: | 80 ℃ لمدة 20 دقيقة | شروط رد الفعل الموصى بها: | 1× FuniCut™ Buffer; 1 × FuniCut ™ Buffer ؛ Incubate at 37℃. احتضان عند 37 در |
| تسليط الضوء: | هضم الحمض النووي 15 دقيقة إنزيم BsaI,إنزيم هضم الحمض النووي السريع BsaI,إنزيمات BsaI كاشف كيميائي حيوي |
||
الانزيمات BsaI
الإنزيمات عبارة عن سلسلة من إنزيمات التقييد المهندسة لسرعة هضم الحمض النووي في 5-15 دقيقة.يمكن استخدام الإنزيمات لهضم DNA البلازميد والجينوم والفيروسات وكذلك منتجات PCR.تُظهر جميع الإنزيمات نشاطًا فائقًا في المخزن الشامل ، لذا فقد تم تبسيط نظام تفاعل الهضم الإنزيمي.علاوة على ذلك ، توفر الإنزيمات تكرارًا ممتازًا للإنزيمات ، مما يتيح سهولة هضم الركيزة الزائدة أو القوالب الصعبة.
الشحن والتخزين
يتم شحن المكونات مع كيس ثلج ويمكن تخزينها في درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة عامين.
موقع القطع
5'-GGTCTC (N)1↓ -3 '
3'-CCAGAG (N)5↑ -5 '
شروط رد الفعل الموصى بها
1 × FuniCut ™ Buffer ؛احتضان عند 37 درجة مئوية.
التعطيل الحراري
الحضانة عند 80 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
مراقبة الجودة
1. تعريف النشاط:تم هضم 1 ميكروغرام من pPIC9K DNA تمامًا باستخدام 1 ميكرولتر من الإنزيم في 15 دقيقة عند 37 ℃ في حجم تفاعل إجمالي قدره 20 ميكرولتر.
2. الحضانة المطولة / فحص النشاط النجمي:لا يوجد تدهور قابل للاكتشاف لـ 1 ميكروغرام من الحمض النووي pPIC9K بسبب تلوث نوكلياز أو نشاط نجم حدث أثناء الحضانة مع 1 ميكرولتر من FuniCut ™ BsaI لمدة 3 ساعات عند 37.قد ينتج عن الحضانة الأطول نشاط نجمي.
3. فحص الربط وإعادة الارتداد (L / R):بعد هضمه بإنزيم 1 ميكرولتر في ظل الظروف المثلى ، يمكن ربط منتج إعادة التدوير من الهضم تحت T4 DNA Ligase عند 22.يمكن إعادة تغليف منتج الربط بواسطة الإنزيم.
4. نشاط نوكلياز غير محدد:أدى احتضان إنزيم 1 ميكرولتر مع 1 ميكروغرام من DNA البلازميد الفائق الالتفاف لمدة 4 ساعات عند 37 ℃ إلى عدم حدوث تغيير في حالة الملف الفائق.
تعليمات
1. بروتوكول الهضم السريع للحمض النووي المختلف
1.1 تُجمع مكونات التفاعل التالية على الجليد بالترتيب الموضح:
| عناصر | DNA البلازميد | منتج PCR | الحمض النووي الجيني |
| ddH2ا | 15 ميكرولتر | 16 ميكرولتر | 30 ميكرولتر |
| 10 × FuniCut ™ Buffer أو 10 × FuniCut ™ Color Buffer | 2 ميكرولتر | 3 ميكرولتر* | 5 ميكرولتر |
| الحمض النووي | 2 ميكرولتر (حتى 1 ميكروغرام) | 10 ميكرولتر (حوالي 0.2 ميكروغرام) | 10 ميكرولتر (5 ميكروغرام) |
| FuniCut ™ BsaI | 1 ميكرولتر | 1 ميكرولتر | 5 ميكرولتر |
| المجموع | 20 ميكرولتر | 30 ميكرولتر | 50 ميكرولتر |
[ملاحظة]: * لمنتجات PCR المنقى.مبلغ 10 ×FuniCut ™ Bufferيمكن تقليله إلى 2 ميكرولتر بسبب القوة الأيونية المتبقية في منتجات PCR غير المنقاة.تمت التوصية بتنقية منتج PCR قبل الهضم عند استخدام منتج PCR للاستنساخ.
1.2 تخلط بلطف (لا دوامة) وتدور لأسفل.
1.3 احتضان عند 37 ℃ لمدة 15 دقيقة (DNA البلازميد) أو لمدة 15-30 دقيقة (منتج PCR) أو لمدة 30-60 دقيقة (الحمض النووي الجيني).
1.4 اختياري: تعطيل الإنزيم بالتسخين لمدة 20 دقيقة عند 80 درجة مئوية.
2. الهضم المزدوج والمتعدد للحمض النووي
2.1 استخدم 1 ميكرولتر من كل إنزيم ورفع مستوى ظروف التفاعل بشكل مناسب.
2.2 يجب ألا يزيد الحجم المشترك للأنزيمات في خليط التفاعل عن 1/10 من الحجم الكلي للتفاعل.
2.3 إذا كانت الإنزيمات تتطلب درجات حرارة تفاعل مختلفة ، فابدأ بالإنزيم الذي يتطلب درجة حرارة أقل ، ثم أضف الإنزيم الثاني واحتضنه عند درجة حرارة أعلى.
3. توسيع نطاق تفاعل هضم البلازميد DNA
| عناصر | الحجم (20 ميكرولتر) | الحجم (20 ميكرولتر) | الحجم (50 ميكرولتر) |
| الحمض النووي | 1 ميكروجرام | 2 ميكروجرام | 5 ميكروجرام |
| FuniCut ™ XbaI | 1 ميكرولتر | 2 ميكرولتر | 5 ميكرولتر |
| 10 × FuniCut ™ Bufferor10 × FuniCut ™ Color Buffer | 2 ميكرولتر | 2 ميكرولتر | 5 ميكرولتر |
| المجموع | 20 ميكرولتر | 20 ميكرولتر | 50 ميكرولتر |
[ملحوظة]: الحضانة في ترموستات مائي أو ترموستات معدني أو ترموستات رملي.زيادة وقت الحضانة إذا تجاوز حجم التفاعل الكلي 20 ميكرولتر.
عدد مواقع التعرف في DNA
| λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18 / 19 | SV40 | M13mp18 / 19 | Adeno2 |
| 2 | 0 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | 1 |
آثار الميثيل على الهضم
| سد | Dcm | CpG | إيكوكي | إيكوبي |
| بدون تأثير | ممنوع عند التداخل | ممنوع عند التداخل | بدون تأثير | ممنوع عند التداخل |
النشاط في مخازن مختلفة
| FuniCut ™ Buffer |
الحرارية العلمية FastDigest العازلة |
NEB CutSmart®متعادل |
تاكارا QuickCut ™ Buffer |
|
| نشاط | 100٪ | 100٪ | 100٪ | 100٪ |
إذا كان لديك أي سؤال حول هذا الإنزيمات BsaI ، من فضلك أعلمنا ، شكرا لك
اتصل شخص: Ms Kris
الهاتف :: +8613049739311
